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酶標儀在臨(lin)床(chuang)(chuang)實驗方面(mian)應(ying)用廣泛,用于鑒別乙肝兩對半,HIV,鑒定(ding)DNA等(deng)許多(duo)方面(mian),可以(yi)說它是(shi)臨(lin)床(chuang)(chuang)及醫學(xue)實驗*的(de)基礎設(she)備。
酶(mei)標(biao)儀的常見故障(zhang)及(ji)故障(zhang)分析:
故障一:測量的(de)結果重現性不好(hao),即使(shi)用空板測量誤差也(ye)在(zai)允許(xu)的(de)范(fan)圍(wei)之(zhi)外(wai)。
故(gu)障分析:檢查(cha)試劑發(fa)現沒有(you)問題,檢查(cha)判定公式也沒有(you)問題,檢查(cha)光路也沒有(you)污染。幾(ji)經周折(zhe)終于發(fa)現卡微(wei)板的卡簧在伸縮后沒有(you)卡到位,造成微(wei)板在測量時在機(ji)內晃(huang)動影響測量結果(guo)不準(zhun)。
故障二:測(ce)量結果(guo)OD值偏低。
故障分析:排除完燈的能量值偏(pian)低(di)后(hou),檢查發現濾光片上有灰塵,用蒸餾(liu)水和擦鏡紙(zhi)擦洗干凈晾干后(hou)故障排除。
測(ce)試方法:酶標儀(yi)的(de)儀(yi)器(qi)指標在較(jiao)佳狀態,就儀(yi)器(qi)的(de)精度(du)測(ce)試和(he)儀(yi)器(qi)的(de)線性度(du)介(jie)紹幾種測(ce)試方法。
精度測(ce)試(shi):該過程可被用于檢測(ce)不同(tong)微板之(zhi)間的測(ce)量精度。
使(shi)用(yong)新制備的(de)在(zai)0.1%TWEEN20中的(de)橘黃色(se)甲基(ji)填充(chong)微(wei)孔,在(zai)每(mei)個微(wei)孔中使(shi)用(yong)不同稀釋度(du)的(de)溶(rong)劑以便獲得一(yi)個光(guang)密度(du)范圍,首(shou)先確(que)保(bao)每(mei)孔注入200mL液(ye)體,使(shi)用(yong)492nm慮光(guang)片測量至少3次,對每(mei)一(yi)微(wei)孔進行下列計算:
(1)平(ping)均OD值(zhi)(zhi);(2)較(jiao)高和(he)較(jiao)低值(zhi)(zhi);(3)平(ping)均值(zhi)(zhi)。較(jiao)高和(he)較(jiao)低值(zhi)(zhi)之(zhi)(zhi)間(jian)的(de)差值(zhi)(zhi)和(he)百分比。讀數范(fan)圍在0.000到2.000Abs。同(tong)一(yi)孔平(ping)均值(zhi)(zhi),較(jiao)高值(zhi)(zhi)和(he)較(jiao)低值(zhi)(zhi)之(zhi)(zhi)間(jian)的(de)差值(zhi)(zhi)應該在+/一(yi)1.0%和(he)+/一(yi)0.010OD范(fan)圍內。
讀數范圍(wei)(wei)在(zai)(zai)2.000到3.000Abs同一(yi)孔平均值,較高和(he)較低值之間的差(cha)值應(ying)在(zai)(zai)+/一(yi)1.0%和(he)+/一(yi)0.005OD值范圍(wei)(wei)內。讀數范圍(wei)(wei)在(zai)(zai)3.000Abs以上(shang)時準確度不符合要求。
酶標儀儀器(qi)線性(xing)度(du):儀器(qi)的線性(xing)度(du)可(ke)使用一種溶(rong)劑的稀釋(shi)系列得(de)到。如可(ke)在492 nIn處(chu)測量在0.1%TWEEN20中的橘黃色(se)甲基的稀釋(shi)系列。
具體方法(fa)如下:在參考光(guang)(guang)密度(du)計(ji)上測量(liang)被稀(xi)(xi)釋的(de)(de)(de)溶劑,畫(hua)出(chu)OD值(zhi)對已(yi)知濃(nong)度(du)的(de)(de)(de)點(dian)圖(tu),并畫(hua)出(chu)通(tong)過(guo)這些點(dian)的(de)(de)(de)較好的(de)(de)(de)直線。將從(cong)(cong)系(xi)列(lie)稀(xi)(xi)釋中測得的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)(guang)度(du)值(zhi)與(yu)(yu)該(gai)圖(tu)比較從(cong)(cong)而計(ji)算(suan)(suan)出(chu)各稀(xi)(xi)釋度(du)的(de)(de)(de)濃(nong)度(du)。微(wei)板(ban)中每(mei)種(zhong)(zhong)稀(xi)(xi)釋度(du)加入250t,-L,對每(mei)種(zhong)(zhong)稀(xi)(xi)釋至少使用(yong)(yong)兩(liang)個樣(yang)(yang)本(ben),以便降低因加樣(yang)(yang)引起的(de)(de)(de)誤差。測量(liang)微(wei)板(ban)使用(yong)(yong)測量(liang)模式,利用(yong)(yong)測量(liang)得到(dao)的(de)(de)(de)平均OD值(zhi)和每(mei)個樣(yang)(yang)本(ben)的(de)(de)(de)已(yi)知濃(nong)度(du)畫(hua)一(yi)條OD濃(nong)度(du)的(de)(de)(de)曲線,從(cong)(cong)系(xi)列(lie)稀(xi)(xi)釋中測得的(de)(de)(de)吸(xi)光(guang)(guang)值(zhi)與(yu)(yu)該(gai)曲線比較從(cong)(cong)而計(ji)算(suan)(suan)出(chu)各稀(xi)(xi)釋度(du)的(de)(de)(de)濃(nong)度(du)。
對光(guang)度(du)(du)(du)記和本儀(yi)器,比較計算(suan)的濃(nong)度(du)(du)(du),不準(zhun)確度(du)(du)(du)不應大于(yu)以(yi)下,使用標準(zhun)濾光(guang)片492nm時吸光(guang)度(du)(du)(du)在0.000~2.000Abs+/一1%、2.000~3.000Abs+/一1.5%。使用梯(ti)度(du)(du)(du)濾光(guang)片492nm時,吸光(guang)度(du)(du)(du)在0.000~2.500Abs+/一2%。

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