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酶(mei)標儀(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一種常用的實驗技術,用于(yu)檢測和定(ding)量(liang)分析生(sheng)物樣品(pin)中特(te)定(ding)分子的存在或(huo)(huo)濃度,如蛋白質、抗體(ti)、激素(su)等。它主要基于(yu)酶(mei)與抗原或(huo)(huo)抗體(ti)之(zhi)間的特(te)異性結合反(fan)應來實現。
酶(mei)標儀(yi)的基本使用方法如下(xia):
準備試(shi)(shi)劑和(he)樣品(pin):根據實驗的要求準備好所需的試(shi)(shi)劑和(he)樣品(pin),包括(kuo)酶(mei)標(biao)板(ban)、酶(mei)標(biao)板(ban)涂層物、抗原或抗體溶液、標(biao)準曲線樣品(pin)和(he)待(dai)測(ce)樣品(pin)等(deng)。
酶標板涂(tu)層:將涂(tu)有特定(ding)抗(kang)(kang)原或抗(kang)(kang)體的(de)酶標板孔進(jin)行涂(tu)層。涂(tu)層可以通過直(zhi)接涂(tu)層法(fa)、間接涂(tu)層法(fa)或夾心法(fa)等不同的(de)方法(fa)進(jin)行。
洗滌:用洗滌緩沖(chong)液洗滌酶標板(ban),去除未(wei)結合的物質,以減少非(fei)特異性背景信號。
孵育:將(jiang)待(dai)測樣品(pin)和標準曲線樣品(pin)加入(ru)酶標板的孔中,使其與涂層的抗原或抗體發(fa)生(sheng)特異性結合反應。孵育時間和溫度根據(ju)實(shi)驗要求設定。
洗滌:再次用(yong)洗滌緩沖液(ye)洗滌酶(mei)標板,去除(chu)未(wei)結(jie)合的物質(zhi)。
反應:加入特定的(de)酶標(biao)記物(wu)(通常是辣根過氧化物(wu)酶或(huo)堿性磷(lin)酸酶),使其與待測(ce)樣品中(zhong)的(de)目標(biao)物(wu)質(zhi)結(jie)合。
洗滌:進(jin)行(xing)*后一次洗滌步驟,去除未結合的酶標(biao)記物(wu)。
反(fan)應(ying)停(ting)(ting)止:加入(ru)適(shi)當的(de)反(fan)應(ying)停(ting)(ting)止液,使(shi)酶(mei)標記(ji)物的(de)反(fan)應(ying)停(ting)(ting)止。
讀取結果:使(shi)用(yong)酶標(biao)儀(yi)測量(liang)吸光度,根據標(biao)準曲線計算樣(yang)品中目標(biao)物質的(de)濃(nong)度。
需要注(zhu)意的(de)是,具體(ti)的(de)酶標儀使用方法可能會因(yin)不同型號(hao)和品牌(pai)而有所差異(yi),因(yin)此在進行(xing)實驗前,應仔細閱(yue)讀并按(an)照(zhao)儀器和試劑的(de)說明書進行(xing)操作。

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