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酶標儀(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)是一(yi)種常用(yong)(yong)的生(sheng)物(wu)化學(xue)分析技術,用(yong)(yong)于(yu)檢(jian)測(ce)和定(ding)量分析樣品(pin)中特定(ding)分子(如蛋白質、抗(kang)體、激素等(deng))的存在和濃度。它的主要用(yong)(yong)途包括醫學(xue)診斷、生(sheng)物(wu)學(xue)研究、食品(pin)安全監測(ce)等(deng)領(ling)域。
酶標儀(yi)的工(gong)作原理基于(yu)酶的特異性反應和光學(xue)檢測。一般來說,酶標儀(yi)的操(cao)作步驟包括以下(xia)幾個關鍵步驟:
涂(tu)覆:將待檢(jian)測物(如抗(kang)原或抗(kang)體(ti))固定在試(shi)驗板上,形成一個涂(tu)層。
阻斷:加入阻斷試劑,防止非特異性結合。
反應:加入待檢測樣(yang)品,使(shi)樣(yang)品中的目標分子與涂(tu)層上的特異性抗體結(jie)合。
洗(xi)滌(di)(di):通過洗(xi)滌(di)(di)步驟去(qu)除非特異性(xing)結合物。
探針:加入與(yu)目標(biao)(biao)分子(zi)結合的(de)酶標(biao)(biao)記(ji)物(如酶標(biao)(biao)記(ji)的(de)抗(kang)體),形成復合物。
洗滌:再次(ci)洗滌去(qu)除未結合的酶(mei)標記(ji)物。
底物(wu)添加:加入底物(wu),使酶標記物(wu)催化(hua)反應生成(cheng)可(ke)測(ce)量的信號物(wu)質(zhi)(如(ru)發光、顏(yan)色變(bian)化(hua)等(deng))。
讀數:使用酶標儀測量信號的強度,根(gen)據標準曲(qu)線(xian)或計算(suan)得(de)出待檢測物(wu)的濃度。
酶標儀(yi)的(de)工作(zuo)原(yuan)(yuan)理基于(yu)特異性(xing)的(de)抗體-抗原(yuan)(yuan)相互作(zuo)用(yong)以及酶對底物(wu)的(de)催化反(fan)應。通過(guo)測量底物(wu)反(fan)應生成的(de)信(xin)號物(wu)質的(de)光(guang)學性(xing)質,如吸光(guang)度、發光(guang)強度或顏(yan)色變化,可以間接地(di)推測出(chu)樣品中目(mu)標分子的(de)存(cun)在和濃度。
酶(mei)標儀具有高靈(ling)敏(min)度、高特(te)異性和廣泛(fan)的應用范圍,因此被廣泛(fan)應用于醫學診斷、生物學研究(jiu)和食品安(an)全監測等領域。
